Blog · Tutoriales HPLC
Guías prácticas escritas por químicos analíticos. Sin teoría innecesaria, los conceptos clave, las decisiones de método y los problemas comunes que aparecen en el laboratorio real.
Cómo leer un cromatograma de HPLC
Una guía para empezar: los ejes, el tiempo muerto, el tiempo y el factor de retención (k), área vs altura para cuantificar, resolución, número de platos y el factor de tailing, las cinco preguntas que convierten un gráfico en un dato.
Leer artículo →Picos negativos en HPLC: causas y soluciones
Un pico negativo no siempre es un fallo. Distingue las cuatro causas por su huella, índice de refracción (a menudo normal), disolvente de muestra, la longitud de onda y los picos de vacancia, y aplica la solución específica.
Leer artículo →Cómo calcular la concentración a partir del área de pico
Convierte un área de pico en un número: curvas de calibración con estándar externo, factor de respuesta de un punto y el método del estándar interno, con las fórmulas, un ejemplo resuelto y los errores que arruinan un buen cromatograma.
Leer artículo →El mapa de resolución: por qué la mejor Rs casi nunca es donde debes trabajar
Un mapa de resolución barre dos variables del método y pinta la resolución del par más difícil de toda la ventana a la vez. La trampa: la celda de máxima Rs suele estar en un acantilado que la deriva normal del equipo rompe. Cómo leer el espacio de diseño (QbD/ICH Q8), el punto robusto y la migración del par crítico.
Leer artículo →El parámetro S del modelo LSS: por qué la fuerza del solvente depende del analito
El parámetro S de la ecuación log k = log kw − S·φ no
es constante: crece con el tamaño del analito (S ≈ 0.25·√M). Qué
significa, cómo se estima, las excepciones (bases, esteroides) y por qué
modelarlo por analito es lo que hace fiel la predicción a alto % de orgánico.
Análisis de vitaminas por SFC/UHPLC híbrido: la estrategia complementaria
Las liposolubles y las hidrosolubles viven en universos químicos opuestos, combinar SFC con UHPLC permite separarlas en un solo sistema. Resumen y aprendizajes de la nota Agilent 5991-9192EN (Naegele, 2018), incluyendo columnas, MRM, parámetros del triple cuadrupolo y las 15 vitaminas analizadas.
Leer artículo →Diagnóstico de tailing en HPLC: causas y soluciones
El tailing (cola de pico) es el problema #1 en cromatografía líquida. Te enseñamos a identificar su origen, silanol activo, sobrecarga de columna, conexiones muertas, pH inadecuado, y la solución específica para cada caso.
Leer artículo →Gradiente vs isocrático: ¿cuándo usar cada uno?
La elección entre elución isocrática y gradiente determina la duración de tu método, la separación, y el costo. Te damos la regla del 2× (Snyder) y un árbol de decisión para elegir bien la primera vez.
Leer artículo →Comparar columnas C18: el modelo HSM Snyder-Dolan en práctica
No todas las C18 son iguales. El Hydrophobic Subtraction Model (HSM) predice qué tan parecidas son dos columnas según 5 parámetros físicos. Te enseñamos a leer la tabla HSM y a elegir un reemplazo equivalente (o uno ortogonal) para tu método.
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